por r130 el Mié Oct 24, 2007 5:21 pm
MIREN LO QUE ENCONTRE:
(Volviendo al Tema)
COMPLEJO MULTIMÉRICO PARA ESTEROIDES ANABOLIZANTES Y GLUCOCORTICOIDES (CMAG) EN RETÍCULO ENDOPLÁSMICO HEPÁTICO
Autor: PÉREZ MACHÍN RUBÉN
Año: 2002
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA
Centro de lectura: CIENCIAS MEDICAS Y DE LA SALUD
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
Resumen: Durante los últimos años, el reconocimiento de la complejidad de los efectos celulares de los esteroides se ha visto sustancialmente incrementado. De acuerdo a su mecanismo de acción clásico, los esteroides se unes a receptores pertenecientes a la superfamilia de "factores de trasncripción dependientes de ligandos" para modular la transcripción. Pero, aunque este es el mecanismo más estudiado no es, ni mucho menos, el único ya que los esteroides también ejercen efectos que ocurren independientemente de la transcripción génica. Recientes estudios indican que los esteroides usan proteínas localizadas en las membrenas celulares para modular múltiples funciones biológicas. Estos efectos suelen iniciarse en la membrana plasmática y resultan en la regulación de vías de señalización intracelular mediadas por proteínas de membrana. Sin embargo, una de las mayores controversias sobre los efectos no genómicos de los esteroides ha sido la identificación de la naturaleza de las proteínas de membrana que median estas acciones. Estas proteínas, localizadas en la membrana plasmática o en membranas intracelulares, pueden ser: 1,- Proteínas de membrana relacionadas estructuralmente con los receptores nucleares clásicos. 2,- Proteínas de membrana que no están relacionadas con los receptores nucleares clásicos. En la presente Tesis, se ha caracterizado una proteína heterooligomérica que hemos denominado Complejo Multimérico para esteroides Anabolizantes y Glucocorticoides (CMAG). El CMAG no está relacionado con los receptores nucleares clásicos y parece jugar un papel en el mecanismo de acción de algunos esteroides anabolizantes-androgénicos (17alfa-AA). El CMAG se encuentra asociado al retículo endoplasmico hepático y presenta dos poblaciones de lugares de unión para esteroides cuyas características farmacológicas están perfectamente diferenciadas y que definen las actividades de esta proteína multimérica: 1,- El Lugar de Unión con Baja Afinidad para Glucocorticoides (LUBAG). 2,- El Lugar de Unión para Estanozolol (LUES). Este último también ha sido identificado en membranas de hígado humano. La solubilización del CMAG en estado funcional a partir de la fracción microsomal del hígado de rta nos ha permitido caracterizar a esta proteína atendiendo a los siguientes parámetros: 1,- Propiedades farmacológicas. 2,- Propiedades hidrodinámicas. 3,- Composición peptídica. 4,- Mecanismo de interacción del estanozolol (ST) y de su principal metabolito urinario el 16beta-hidroxiestanozolol (16betaOHST) y con el CMAG. 5,- Regulación hormonal y farmacológica de los péptidos que componen el CMAG. El CMAG es una proteína integrada en las membranas del retículo endoplásmico hepático. El detergente CHAPS proporciona su solubilización óptima sin que se produzcan cambios significativos en sus propiedades farmacológicas: las especificidades farmacológicas del LUBAG y LUES no guardan parecido con la de ningún otro receptor de esteroides clásicos o proteína fijadora de esteroides conocida. El estudio de las propiedades hidrodinámicas del CMAG evidencian una masa molecular de, al menos, 134 kDa. Su marcaje covalente por fotoafinidad con los ligandos del LUBAG y del LUES segudio de SDS-PAGE nos ha permitido identificar a tres péptidos de 55-, 31- y 22 kDa, respectivamente. Los dos primeros con capacidad para fijar específicamente tanto dexametasona (DEX) como ST, mientras que el tercero sólo pudo ser identificado con ST. A diferencia de otros 17alfa-AA, ni el ST ni su principal metabolito urinairo, el 16betaOHST se unen al Receptor de Glucocorticoides (RG) clásico. Sin embargo, el CMAG los une con elevada afinidad: Kd=30 nM y Kd = 13 nM para el ST y el 16betaOHST, respectivamente. Estos sugiere que si estos esteroides, tal como ha sido propuesto por otros autores, antagonizan las acciones de los glucocorticoides, lo harían a través de un mecanismo independiente del RG. Un candidato a este mecanismo de acción es el CMAG. Tanto el ST como el 16betaOHST aceleran la velocidad de disociación de los glucocorticoides desde el CMAG. Este efecto lo atribuimos a la existencia de un lugar de unión secundario para estos 17alfa-AA cuya ocupación produce un alosterismo negativo sobre el lugar de unión para glucocorticoides del CMAG. En relación con su regulación hormonal, las actividades del CMAG se ven drásticamente disminuídas en el animal hipofisectomizado y están sujetas a un sofisticado control multihormonal. Sin embargo, tal como se demuestra en el animal hipotiroideo, las dos actividades que definen al CMAG no están reguladas por idénticos mecanismos. Mientras que en el animal hipotiroideo el CMAG no modifica su actividad para fijar ST, la actividad del LUBAG disminuye drásticamente. Ésta aparece críticamente regulada por las Hormonas Tiroideas y por la Hormona de Crecimiento. Sin embargo, ambas actividades son potentemente inducidas in vivo por el estrógeno 17alfa- etinilestradiol a través de un mecanismo que es independiente de las hormonas hipofisarias. En resumen, el CMAG aparece como una proteína de membrana de naturaleza heterooligomérica formada por péptidos cuyas actividades para unir esteroides están reguladas hormonalmente. La posibilidad de disponer del CMAG solubilizado y el hecho de que sea inducible in vivo son dos pasos muy importantes en el camino hacia la purificación y el descubrimiento del significado funcional de esta proteína fijadora de esteroides que podría explicar los efectos de algunos 17alfa-AA sobre el hígado.
Universidad: PAIS VASCO
Centro de lectura: CIENCIAS
Centro de realización: F
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